超氧化物检测试剂盒(Superoxide Assay Kit)是一种用于超氧化物快速高灵敏度检测的试剂盒。

       超氧化物通常指超氧化物阴离子(superoxide anion) O₂ ^{· -} ，是一种短寿命的自由基， 在呼吸链中，NADPH氧化酶（NOX)把电子传递给氧分子的时候，就会产生超氧化物阴离子O₂ ^{· -} 。超氧化物阴离子O₂ ^{· -} 是一种强氧化剂，可以由被刺激的白细胞等产生，从而抵御微生物的感染等。超氧化物阴离子 O₂  ^- 也可以导致氧化损伤，和许多疾病的发生密切相关。

       本试剂盒利用超氧化物可以还原WST-8产生可溶性橙色的formazan为基础来检测超氧化物，超氧化物的量与产生formazan的吸光度值成正比，因而可通过测OD₄₅₀以确定超氧化物的产生量或含量。本试剂盒，使测定结果更加准确。本试剂盒还提供超氧化物歧化酶SOD作为抑制对照品，可以验证是否存在超氧化物，排除检测体系中可能产生的干扰。对于本试剂盒，加入SOD后通常可以抑制90%以上的超氧化物。

       本产品优点首先是WST-8本身的吸光度很低，背景低因而检测灵敏度高。其次WST-8的还原产物是稳定的可溶性产物，且对细胞基本无毒性，另外，WST-8方法更加适合于基于微孔板的高通量的筛选，均优于细胞色素C法和化学发光法。

       本试剂盒应用于96孔酶标板，可以测定100个样品。

1. 细胞培养在96孔板中，每孔培养至约1-2×10⁴个细胞，用PBS或生理盐水洗涤一次。

2. 配制分析工作液：

    按每个样本 用200µl的分析Buffer，加入10µl的WST-8，配制成为分析工作液，100个样本则用20ml分析Buffer与1ml的WST-8混合而成。

3. 配制XOD工作液（可选），即用即配，由 25µl黄嘌呤与 25µl黄嘌呤氧化酶XOD混合而成，用以生成超氧化物，作为阳性对照。

4.按下表设对照组（每组设复孔），每孔细胞中加入200µl分析工作液，37ºC孵育3min,   

（1）超氧化物诱导剂需用户自备，例如：终浓度2ng/ml的PMA等，诱导10-60分钟或更多时间。

（2）阴性对照（可选项）：2µl SOD，与产生的超氧化物发生歧化反应，生成O2和H2O2。。

（3）阳性对照（可选项）：XOD工作液生成超氧化物

（4）阳性负对照（可选项）：加2-20µl SOD。与黄嘌呤/黄嘌呤氧化酶体系生成的超氧化物发生歧化反应。

5.  在诱导剂作用时间完成后, 用酶标仪在450nm测定吸光度，或在作用时间内间5-10min进行动态测定。

-20℃，1年