本试剂盒是通过测定细胞释放到培养基中的葡萄糖-6-磷酸脱氢酶 (G6PD) 活性进而测定细胞毒性的试剂盒。 G6PD是存在于细胞质的戊糖磷酸代谢路径的酶，由于其产生NADPH,因此在细胞抗氧化保护中起着关键作用。当细胞受到损伤时G6PD会释放到培养基中,检测培养基中G6PD量可以作为测定损伤细胞数量的指标。

   本试剂盒可检测损伤细胞所释放出的G6PD和或组织等样品中的G6P含量，具体原理如下：葡萄糖-6-磷酸(G6P)在葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(glucose-6-phosphate dehydrogenase, G6PD)的催化作用下生成6-磷酸葡萄糖酸内酯(6-phosphogluconate, 6-PG)，在这一反应过程中NADP+被还原为NADPH，生成的NADPH在电子耦合试剂1-mPMS (1-Methoxy-5-methylphenazinium Methyl Sulfate)的作用下将水溶性四唑盐WST-8 (无色) 还原成甲臜产物formazan (橙色)，在450nm左右有最大吸收峰。反应体系中生成的formazan与样品中总的G6P的量呈正比关系，利用此原理可以测定死细胞和损伤细胞的数量（图1）。

              图1. WST-8法检测G6PD的原理图 

本试剂盒适用于检测细胞、组织以及其它适当样品。 

本试剂盒用于96孔板 按每孔体积100μl 可以测定100个样品。 

特点： 

更低背景：因细胞培养血清中的G6PD含量低于LDH，因此本法分析的背景信号明显低于LDH释放法的背景信号，抗干扰能力强而准确性高。

v 操作简单：不需要分离，直接加入培养液或样本即可检测，且对细胞无损害。

v 仪器常用：采用常规酶标仪检测。 

v 稳定方便：工作液可冷藏保存6个月，不需要现配现用，适用于高通量筛选。

v 双重验证：配合使用CCK-8可获得死细胞和活细胞的结果。

 1. 于96孔板的每孔接种50μl的500-25000个细胞，同时设无细胞的样品Blank组、无药物的空白对照组、加细胞裂解液的阳性对照组，每组设三个复孔； 

 2. 细胞加入药物孵育至预定作用的时间；

    注：不得超过24 小时， 否则G6PD失活而影响结果准确性。

                               表1 各孔的溶液量 

 3.  取0.5mL组份B加入 5mL的组份A（分析Buffer) 混合均匀配成工作液；

 4.  每孔加入50μl上述配好的工作液；

 5.  仅在阳性对照孔中再加入1μl 细胞裂解液；

 6.  37℃ 避光 孵育10-30 min;

 7.  酶标仪测 450nm 处的吸光度OD值

   8. 计算：将「样品孔-样品Blank孔」、「阳性对照孔」、「空白对照孔」的吸光度，计算出n=3的平均值。

 细胞毒性（损伤率）根据如下公式计算：

    细胞毒性（损伤率）(%) = [(A-C)/(B-C)] ×100

        A：样品的平均吸光度 (样品孔-样品Blank孔)

        B：阳性对照的平均吸光度

        C：空白对照的平均吸光度 

    -20℃，1年