溶酶体是含有多种酸性水解酶的囊泡状结构的细胞器，其功能作用为消化分解细胞内多余的废物、碎片、胞器、自噬小体、食物颗粒和吞噬的病毒或细菌等。溶酶体膜允许消化酶在pH4.5下工作，与微碱性胞浆（pH 7.2）相比，溶酶体内呈酸性（pH 4.5-4.8），溶酶体通过质子泵和氯离子通道从细胞质中泵出质子来维持这种pH差异。溶酶体的功能变化涉及到细胞粘附，趋化性，多药耐药性，细胞凋亡、自噬、防御、参与分泌调节 形成精子顶体等；多种疾病如砂肺、肺结核、各类溶酶体贮积症等遗传病）、休克、类风温关节炎和肿瘤等都与其紊乱相关，因此本探针可用于上述研究，例如，在某些肿瘤细胞的溶酶体具有较低的pH值，而有的肿瘤细胞则相反。此外，囊性纤维化和其它疾病中会发生细胞器酸化的缺陷。探针在溶酶体的形成与病理、药理、毒理研究上有较多的应用。

   本溶酶体pH荧光指示剂—PDMPO，又名溶酶体黄/蓝双荧光探针，Lyso-Sensor Yellow/Blue ,其独特之处在于，它同时具有呈 pH值依赖性的双激发Ex和双发射Em光谱峰。但在活细胞中仅呈现pH依赖性的双发射波长Em，即在酸性低pH值的细胞器中PDMPO通常发出强烈的黄色荧光，而在酸性减弱时较高pH下则发出强烈的蓝色荧光，此特征可用于酸性细胞器（如溶酶体或精子顶体）的pH比率分析。.PDMPO具有极大的斯托克斯位移和出色的光稳定性，适用于荧光成像、荧光酶标仪和流式细胞仪。PDMPO已被用于鉴定作为蒽环类药物在耐药细胞系中聚集位点的溶酶体，也广泛用于海洋硅藻中二氧化硅沉积和运输的示踪剂。PDMPO也适于与其它生物标志物偶联检测荧光信号，也可与其它绿色荧光染料如GFP，Fluo-8，钙黄绿素或FITC标记的抗体等组合，进行多重标记以检测细胞的各种功能 。

   PDMPO的pKa 为4.2，双激发和双发射波长分别为Ex分别为340/400 nm时的Em=520 nm;和Ex为365 nm时Em为450/510 nm，适配微孔板荧光法、荧光成像、流式等检测荧光信号的变化，但主要使用Ex为365 nm时的Em为450nm与540 nm之比，来表示pH变化代表溶酶体pH的变化。

   本产品为试剂盒形式，除荧光探针之外，还配有分析Buffer，以保持荧光信号稳定性及胞器内保留性。

   注意，本探针仅用于溶酶体的标记、定位染色，而不能用于定量, 因为溶酶体的荧光可能仅占细胞总荧光量的一小部分，因此不能通过流式细胞术或荧光光度法来定量溶酶体的数量或pH值的量化。

 微量产品，在打开管盖之前，移放并恢复至室温，再将探针进行短暂离心集液于管底。

1. 成像分析

1.1 将1 mM荧光探针原液（组份A）用分析Buffer（组份B）稀释至工作浓度1-10μM：

     为减少探针过载可能产生的假信号，应尽量使用低浓度探针，但不应低于1μM。              

     注意：如果染色后细胞在无染料的培养基中培养，经常会观察到荧光信号下降和细胞膜空泡化。              

1.2 培养好的细胞弃培养基，加入预热的探针工作液。按原培养条件继续培养30min~2h, 弃染液，加入新培养基；

1.3 荧光显微镜观察，Ex=360nm，Em分别为450nm和540nm.

   如果细胞染色不充分，建议增加标记浓度或延长染料在溶酶体中积累的时间。

   最佳染色的探针浓度与时间应根据细胞类型与用途而调整，上述说明仅为指导性的初始条件。

2. PDMPO 荧光微板法检测分析荧光比率

2.1 准备细胞：

2.2 配制PDMPO工作液   

     将1 mM荧光探针原液（组份A）用分析Buffer（组份B）稀释至工作浓度1-10μM（标记工作液）：

     为减少探针过载可能产生的假信号，应尽量使用低浓度探针，但不应低于1μM。；

2.3  染色标记：微孔板培养好的细胞弃培养基，每孔加入100μL（96孔板）或25μL /孔（384孔板）的标记工作液。

2.4  细胞培养箱中孵育5~20 min；

2.5  弃标记液，加入组份B或培养基；

2.6  荧光酶标仪检测，激发 Ex = 360nm，检测Em = 450和540nm 的荧光值，并计算二者的比率。