碧波线粒体提取试剂盒用于快速从动物细胞或组织中分离出完整、纯化的线粒体。线粒体的分离原理基本上采用：第一，通过机械方法破裂细胞；第二，通过低速差速离心去除残渣碎屑和巨大细胞器；第三，通过高速差速离心获得线粒体。

适合于动物软组织（肝或脑组织）和硬组织（肌肉）以及培养细胞的线粒体的制备。获得的线粒体纯度较高，并且绝大部分分离获得的线粒体都含有完整的内膜和外膜，并具有线粒体的生理功能。可以被用于细胞凋亡、信号传递、代谢和蛋白组学等的研究。产品不含污染性蛋白酶和核酶。

低温高速离心机、剪刀、微量移液器、1.5m L离心管、涡旋振荡器、相差显微镜下、PBS

1、 样品的处理

A、 培养细胞裂解匀浆

    a、 按照常规方法收集细胞。用PBS洗涤一次细胞并计数， 离心（2000rpm，5min）收集细胞，吸尽上清。每次提取需要5×10⁷个细胞。

     b、 加入1.5mL预冷的裂解液重悬细胞，冰浴放置10～15min。

                      c、将细胞悬液转移到小容量玻璃匀浆器内，冰浴的过程中用间隙严密的研杵研磨细胞30～40次（相差显微镜下检查未裂解细胞应在50%左右即可）

    d、 转入第2步进行操作。

     B、组织裂解匀浆

          a、 称取100～200 mg新鲜组织如肝脏、脑、心肌等，PBS或生理盐水冲洗，洗净血水，滤纸吸干。

          b、 把组织放在一个置于冰上的离心管或培养皿中，用剪刀或刀片把组织剪切成非常细小的组织碎片。

          c、 加入1.5 mL冰预冷的裂解液，冰浴的过程中用间隙严密的研杵研磨细胞20次。（相差显微镜下检查未裂解细胞应在50%左右即可）

         d、 转入第2步进行操作。

2、 将细胞或组织匀浆物转移到预冷的离心管中，4℃，800×g离心5 min。细胞核、大的膜碎片、未裂解细胞等在管底。

3、 在另一个新的预冷的离心管中预先加入0.5mL 溶液A，将匀浆后离心得到的上清液0.5mL（溶液A：上清液体积=1：1）沿管壁小心地加入含有溶液A的离心管中，覆盖于溶液A的上层。

4、  4℃离心（15,000×g 10 min）。离心后的上清为胞浆成分，将上清转移到新离心管，沉淀则为线粒体。

5、  往沉淀中加入0.2 mL漂洗液重悬线粒体沉淀，4℃离心（15,000×g 10 min），弃上清。

6、 用50 ～100µL储存液或合适的缓冲液重悬线粒体沉淀，立即使用或−70 ºC保存。

    （加入储存液体积的估算：50 µL/每100 mg组织，100 µl/5 × 10⁷个细胞）

-4℃保存。

1、 全程低温操作，将样品管放在冰水浴而不是碎冰块中。

2、 微量制备比大规模制备操作更方便和快速，因而更容易获得完整的线粒体。

3、 在不破坏亚细胞器的情况下破碎细胞是制备线粒体的最关键环节。与组织块相比，细胞特别是贴壁培养细胞在用玻璃匀浆器匀浆时较难破壁，因而要选用小容量玻璃匀浆器、间隙严密的研杵上下研磨培养细胞。在

     相差显微镜下检查未裂解细胞应在50%左右即可。过度研磨将破坏线粒体，研磨不足将降低得率。

4、 以离心力g计算正确的离心速度，不同的离心机可据此精确计算离心速度。

5、 进行Western Blot和2D电泳，可直接加入样品缓冲液裂解线粒体。

6、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。