罗丹明123（Rhodamine 123）是最常用标记线粒体的阳离子荧光染料，分子量380.82，其可快速通过活细胞膜，仅需几分钟就可以被线粒体所捕获，因此作为经典的线粒体指示剂，并且对细胞没有任何毒性。除动物细胞之外，还适用于检测植物细胞及细菌的线粒体。 罗丹明123同JC-1一样，也常用于检测线粒体膜电位，据此分析细胞凋亡的发生。近年来研究还发现，罗丹明123选择性地定位于肿瘤细胞，且其荧光与线粒体分布的变化密切相关，因此可用于肿瘤细胞的发现和示踪。罗丹明123通常用于流式细胞仪上检测并报告Pgp的功能。罗丹明123还可能是多药耐药相关蛋白MRP1的底物，而对多药抗性蛋白MDR的功能分析，在肿瘤预后上更优于对MDR蛋白表达的分析。

罗丹明123的最大激发波长为507nm，最大发射波长为529nm。其荧光光谱与FITC相似，呈黄绿色荧光，适配几乎全部的荧光检测仪器，包括荧光显微镜、荧光酶标仪、荧光光度计或流式细胞仪。也适用于与常用的蛋白标记染料如PE-Cy5 和 AMCA.的组合进行多重标记与多参数分析。

标记活细胞线粒体的常用终浓度为 1-10μM，根椐细胞种类和检测方法不同而在（0.2-100μM间）优化，或参考相关文献。下述操作方法供参考：

1． 细胞染色及分析

     （1）培养细胞1×10⁶/mL重悬于培养基中；

     （2）在1mL培养液中加入5mM罗丹明123染液1~ 2 μL，使终浓度为5 ~10 μM；

     （3）37℃，5% CO₂细胞培养箱孵育10 min（根椐细胞种类不同而选1~30 min）；

     （4）离心以培养基洗细胞两次；

     （5）重悬细胞于培养基中，37℃，5% CO₂培养60 min（可选）；

     （6）流式细胞仪检测：激发波长488 nm，发射波长530 nm；

          荧光显微镜观察：滴加100 μL上述混合液于载玻片上，激发滤光片波长488nm，阻断滤光片波长515nm 观察，拍照。

2． 组织提取的线粒体染色及分析

（1）按常规方法提取的线粒体，用适量的1×Assays Buffer（将5×Assays Buffer 用dH₂O稀释5倍）重悬；

（2）常规方法进行蛋白含量测定后，用1×Assays Buffer调配成3mg/mL的线粒体溶液；

（3）取2mL 1×Assays Buffer和1mL线粒体溶液；

（4）加入适量待测化合物（同时设空白对照组），25℃保温3 min；

（5）加入5mM的罗丹明123染液 5 μL；

（6） 荧光光度计检测：上述混合液全部加入石英比色皿中，置于25℃下测定，激发波长488nm，发射波长530nm，连续记录从0 min~30 min内荧光强度的变化。