本品适用于标记培养的活细胞，因亲脂性固体染料不易在水溶性培养基中标记活细胞，而本标记液将固体染料制备成为即用型标记染液，直接用于标记培养的活细胞，使用十分简便，标记后的细胞不仅可用于细胞成像，也可用于流式细胞仪分析或荧光酶标仪检测。

1. 悬浮细胞

1.1  以不含血清的培养基悬浮细胞，调整细胞密度为1X10⁶个/mL；（如果大于10⁷/mL或小于10⁵/mL，则需增加标记时间）

1.2  每1 mL细胞悬液加入5 µL的DiO标记液，用移液器轻轻混匀；

1.3  37℃孵育1~20min，不同的细胞类型可参考表2，其它类型细胞初始可选择20 min，可在5 min - 2 h间优化；

1.4  37℃，1500rpm离心5 min；

1.5  弃上清，用37℃的培养基悬浮细胞，重复两次离心洗涤；

1.6  加适量预热培养基，37℃放置10 min，进行荧光显微镜成像分析或流式分析，荧光光谱参数详见表1。

2. 贴壁细胞

2.1  细胞爬片至所需的汇合度，吸去培养基，将爬片放到湿盒中；

2.2  每1mL新鲜培养基中加入5 µL的DiO标记液；

2.3  吸取100μL，轻轻滴加并铺匀，使之盖满整个爬片；

2.4  37℃孵育，不同的细胞类型可参考表2，其它类型细胞初始可选择20 min，可在5 min - 2 h间优化；

2.5  吸弃染色液，用新鲜预热的培养基覆盖并孵育10 min，重复洗三次；

         2.6  加抗荧光淬灭剂的介质（不宜使用甘油），荧光成像分析，荧光光谱参数详见表1和图1。

    表2 优化的细胞染色孵育时间

     图1   DiO DiI DiD DiR 荧光光谱