DiA具有较宽范围跃迁的荧光光谱，其在甲醇中的激发和发射波长分别为456 nm和590 nm，结合脂质后的发射波长很宽（图1），选用不同的滤光器可检测绿、橙、甚至红色荧光，适用于神经元、组织、动物体内的荧光成像分析，常与DiI等染料组合进行双重标记，也用于替代DiO标记其难以标记的固定组织。

   图1.  DiA 结合双层脂膜时的激发波长与发射波长    

1. 固定细胞或组织切片的标记

对于已用4%甲醛固定后的细胞或组织切片（戊二醛固定的样本往往会产生高荧光背景，不建议使用），可采用染料直接标记染色，方法如下：

1.1  4%甲醛固定好的细胞或组织切片，加PBS pH 7.4 室温浸没5 min，重复洗三次；

不可使用去污剂、促渗剂（如吐温、Triton X-100、NP-40等）和高浓度有机溶剂。

1.2  用枪头直接取固体染料覆盖于样本上，或将染料加DMSO配成1~2.5 mg/mL的高浓度染液，滴数滴于样本上，使之浸没样本，放于湿盒内，

1.3  短染的样本置37℃，20 min~2 h（自行优化），需要长期染色的样本（如神经元）可置4℃或室温数周时间；

1.4  PBS洗去染液，加抗荧光淬灭剂介质（不宜用甘油）或封片剂，荧光显微镜检测，荧光光谱参考表1和图1。  

2、与DiI组合标记神经元与神经组织   

本品与DiI组合双色标记运动生长神经元，可在培养基条件下持续跟踪长达四周，在体内长达一年。染料通过在质膜中的缓慢横向扩散均匀标记神经元，固定标本每天扩散0.2~0.6mm，在活体组织里可以达到每天6mm。经过醛固定的组织，Dil的扩增可以持续长达1~2年。