CDCFDA, SE 全名：5-(and-6)-Carboxy-2’,7’-dichlorofluorescein Diacetate, succinimidyl ester，分子式：C₂₉H₁₇Cl₂NO₁₁，分子量：626.35。

CDCFDA SE属于氨基反应性荧光染料，与经典的CFSE相比，CDCFDA SE因对细胞内的pH波动不敏感，即耐受酸性环境，对其荧光无影响，因此更适于嗜酸性的细胞增殖分析与长期追踪。

CDCFDA SE本身无色亦不发荧光，其可扩散至细胞内，其乙酸酯基团-DA SE被细胞内酯酶裂解，在波长492nm激发时，释放的荧光素基团 517nm明亮绿色荧光，其羧基与细胞内蛋白质的氨基发生反应，生成染料-蛋白质加成物，使细胞均匀和稳定着绿色荧光，而过量的未结合的试剂则被动地扩散到细胞外培养基中，可被完全培养基淬灭并洗去。胞内的荧光素-蛋白加成物无论是的细胞分裂和迁移时都能很好地保留在细胞中，胞内荧光信号非常均匀和稳定，而每分裂一次其子代细胞的荧光强度减半，并在子代细胞中仍保持荧光均匀和稳定，据此特征可追踪细胞分裂多达数代或数周， 

CDCFDA SE标记细胞后可用甲醛或戊二醛固定，并仍具有反应活性，可使用染料抗体进行随后的免疫组化标记和检测。

细胞标记后适于流式细胞仪、 荧光显微镜等成像系统、 荧光酶标仪分析。 

CDCFDA SE易吸湿水解，不易长期保存，本品包含1或5个一次性小管染料固体冻干粉和一管高品质无水二甲基亚砜（DMSO），每100µg可标记约40个流式细胞样本，以方便用户酌量使用而不浪费试剂。

1. 配制原液

每100 µg的CDCFDA SE加入40μL的DMSO，溶解配成5mM的原液，于24小时内使用完毕，不宜储存。

2. 配制CDCFDA SE工作液

用PBS将5mM CDCFDA SE原液（1000X）稀释至5µM的工作液，即每mLPBS加入1μL的CDCFDA SE原液，40μL原液可稀释成40mL的标记工作液，将工作液置37℃预热。

（注：超过约三天的长期染色或快速分裂的细胞需5-10μM较高浓度。对于较短期实验，如活力测定，则需0.5-5μM较低浓度。为保持细胞生理正常并减少过载干扰，染料浓度应该保持尽可能低的水平，最好根据具体细胞类型进行滴定，以确定最合适的浓度。使用显微镜观测可能需要比上述流式细胞高五倍的浓度。）

3、细胞标记

悬浮细胞：离心收集，每10⁶个细胞加1mL 37℃预热的标记工作液重悬，避光、室温或37℃孵育20min，其间轻摇数次；

贴壁细胞：弃培养基，加入37℃预热的标记工作液，避光、37℃孵育20min。

4、悬浮细胞：离心收集, 加入标记工作液5倍体积的新配37℃预热培养基, 37℃孵育5min；（去除游离染料）

   贴壁细胞：弃标记工作液，用新配37℃预热培养基洗二次。

5、悬浮细胞：离心收集，加入新配37℃预热的完全培养基，37℃继续孵育15-30min（使染料醋酸根水解）；

贴壁细胞：加入新配37℃预热的完全培养基，37℃继续孵育15-30min。

6、接续的实验，如细胞刺激、加药、培养、固定、通透、其它标记或分析

如需用流式追踪细胞的分裂代次，则培养时间至分裂代次的完成，可长达数天甚至数周。

如需固定和通透，则将标记后的细胞加入PBS洗一次，使用醛类固定剂，如多聚甲醛，室温、避光固定15-20 min，可使用常规通透剂进行通透，通透后再用PBS洗涤细胞，进行后续分析。

如需进行其它标记，将标记后的细胞用后续标记物推荐的缓冲液重悬，再进行标记，包括免疫表型、DNA含量、凋亡或其它推荐的染料。

7、分析

流式细胞仪：用488nm波长激发，530 nm FITC通道（FL1）检测分析。对于细胞分裂代次的追踪，建议将标记等量未分裂的亲本细胞作为阴性对照同时检测，以示增殖前的初始细胞荧光峰的位置和数量。

荧光显微镜等成像系统： 滴加抗荧光淬灭剂的介质，激发并用FITC滤光片观察拍照、分析。

荧光酶标仪：可以定量活细胞数，但需建立接种细胞密度的标准曲线，以确保荧光信号在线性范围内并与细胞数成正比。

1. CDCFDA SE即用即配，其易被水解，配制成5mM原液后，在24小时内使用完毕。

2. 使用高品质无水DMSO溶解，操作需戴手套注意防护。

3. CDCFDA SE需避光操作和保存。

4. CDCFDA SE染料易与氨基反应，不应与含氨缓冲液（如 基于Tris的缓冲液）或聚赖氨酸涂层培养容器或载玻片一起使用。