DAPI（4,6-Diamidino-2-phenylindole ，4,6-二氨基-2-苯基吲哚）是一种DNA特异性的蓝色荧光染料，该染料对细胞膜有较弱的通透性，活细胞着染弱，常用于染死细胞、固定细胞及凋亡细胞。细胞固定后和凋亡细胞的膜通透性增加，对DAPI摄取能力增强，产生比正常细胞更强蓝光染色。DAPI进入胞内优先染dsDNA，结合在DNA双链的AT小沟，结合DNA后的DAPI荧光增强20倍，DAPI也可以结合RNA，DAPI/RNA的复合体（500nm）有比DAPI/dsDNA复合体（460nm）更长的荧光波长。

DAPI常用于多重荧光染色的核复染剂，其蓝色荧光可以与绿色、红色、橙黄色探针组合使用，对比明显。

DAPI也常检测凋亡细胞的核形态，正常细胞的核形态呈圆形，边缘清晰，染色均匀，而凋亡细胞的细胞核边缘不规则，细胞核染色体浓集，着色较重，并伴有细胞核固缩，核小体碎片增加，因此从荧光强度及核形态均可鉴别出细胞发生凋亡的典型特征。DAPI染色可用荧光显微镜、流式细胞仪及荧光光度仪、荧光酶标仪等检测。

1、 DAPI染4%甲醛固定细胞或贴壁细胞（用于荧光显微镜成像分析）

Ø DAPI染液以PBS稀释10-100倍，并滴加覆盖细胞样本，

Ø 室温，避光孵育2-5min；（非固定细胞可调整孵育条件，如37°C，15min）

Ø 荧光成像分析，紫外激发，DAPI滤光片检测蓝色荧光信号，Ex/Em=358/461nm。

2、   染乙醇固定细胞（用于流式细胞分析）

Ø DAPI染液用分析Buffer稀释20倍;

Ø 乙醇固定好的细胞（注），离心弃上清，加入1 mL的DAPI染色液

Ø 室温，避光孵育15 min，

Ø 流式细胞仪分析， Ex/Em=358/461nm。

（注：乙醇固定细胞方法：

Ø 吸取1mL细胞悬液（约2×10⁵－1×10⁶个重悬于PBS中），缓慢地转移至–20°C预冷的4 mL无水乙醇中，最高速涡旋振荡，–20°C放置5–15 min。

Ø 离心沉淀细胞，吸弃乙醇，轻弹管壁使细胞沉淀松散，加入5 mL预热至室温的PBS，

Ø 室温放置15 min，让细胞重新水合后，离心弃上清，即得乙醇固定好的细胞）

3、 DAPI染FISH样本（荧光显微镜分析）

Ø DAPI染液用PBS稀释2000倍，

Ø 每张样本片滴加300µL稀释后的染液，室温，避光孵育30min，

Ø PBS洗一次，滴加抗荧光淬灭的介质，荧光显微镜观察。