7%的Tris-乙酸凝胶可替代6-8%的Tris-甘氨酸凝胶,3-8%的Tris-乙酸凝胶可替代4-6%的Tris-甘氨酸凝胶,分离高达200-500kDa,本产品仅供7%的Tris-乙酸凝胶配制。
1. 参考下表(单张胶的用量)配制下层分离胶
Tris-乙酸 胶浓度
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7%分离胶
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dH2O
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3.74 mL
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Tris-乙酸Gel Buffer
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0.33 mL
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Tris-乙酸分离胶
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0.88 mL
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TEMED(自备)
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5 μL
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10% APS-S
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50 μL
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总体积
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5 mL
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事先备好灌胶玻璃板,按dH2O、Buffer、分离胶的顺序配制,最后加入TEMED和APS-S,然后立即灌胶。
2. 按下表(二张胶的参考用量)配制3.2%上层浓缩胶并在下层胶凝后灌胶
组分
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3.2%上层浓缩胶(2张)
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dH2O
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2.53 mL
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Tris-乙酸Gel Buffer
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0.20 mL
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Tris-乙酸浓缩胶
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0.24 mL
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TEMED(自备)
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3 μL
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10% APS-S
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30 μL
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总体积(二块胶)
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3 mL
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事先备好灌胶玻璃板,按dH2O、Buffer、分离胶的顺序配制,最后加入TEMED和APS-S,然后立即灌胶。
下层胶凝聚后,在上述混合液中最后加入TEMED和APS-S,然后立即灌胶并插入加样梳。
参考1:Tris-乙酸凝胶电泳的 上样、电泳与转膜方法
Tris-乙酸凝胶分为变性SDS和非变性Native胶,并适配不同的上样Buffer、电泳Buffer和转膜Buffer,具体操作如下:
1 电泳样本预处理
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Tris-乙酸变性SDS电泳
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Tris-乙酸非变性电泳
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样本
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x μL
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x μL
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上样Buffer
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4×LDS 样本Buffer 2.5 μL
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2×Tris-甘氨酸上样Buffer 5 μL
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1M DTT(自备)
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0.5 μL
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0
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dH2O 补足至
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10 μL
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10 μL
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热变性
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70℃ 10 min
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2 电泳
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Tris-乙酸变性SDS电泳
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Tris-乙酸非变性电泳
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电泳Buffer
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20 x Tris-乙酸电泳Buffer 25mL
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10 x Tris-甘氨酸电泳Buffer 50 mL
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800×稳定剂
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0.625 mL
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0
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dH2O 补足至
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500 mL
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500 mL
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电压、电流
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150V. 70-90 mA
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150V. 40-45 mA
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电泳时间
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70 min
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2-3 hr
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3 转膜
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Tris-乙酸变性SDS电泳
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Tris-乙酸非变性电泳
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转膜Buffer
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20 x Bis-Tris转膜Buffer 25mL
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20 x Bis-Tris转膜Buffer 25mL
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800×稳定剂
|
0.625 mL
|
0
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甲醇(自备)
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50 mL/单胶,100mL/双胶
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50 mL/单胶,100mL/双胶
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dH2O 补足至
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500 mL
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500 mL
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膜(自备)
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硝酸纤维素 或 PVDF
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硝酸纤维素 或 PVDF
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电压、电流
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30 V. 220 mA/单张胶
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30V. 220 mA/单张胶
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转膜时间
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60 min
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60 min
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附: 《蛋白电泳 凝胶选择指南表》
凝胶体系
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Bis-Tris 体系
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Tris-Glycine 体系 (Tris-甘氨酸)
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Tris-Acetate体系 (Tris-乙酸)
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Tricine体系
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蛋白分离范围
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高分辨、高清晰锐利
宽分子量范围 (2.5-300 kDa)
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经典传统
较宽分子量范围 (6-200kDa)
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高分子量
分离范围 (30-500 kDa)
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低分子量
分离范围 (2- 20 kDa)
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产品应用
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变性电泳 中性 pH 体系 适用于蛋白质免疫印迹、质谱分析,蛋白质翻译后修饰等对检测灵敏度要求高的应用
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变性或非变性电泳 经典 Laemmli 凝胶体系 常用于检测蛋白分子量,蛋白质免疫印迹、凝胶内染色、适用含去垢剂和高盐的样本
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变性或非变性电泳 中性 pH 体系 可更高效地分离、转印和分析高分子量蛋白质 用于蛋白质免疫印迹、质谱分析、蛋白质翻译后修饰.
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变性电泳 分离、转印和分析低分子量蛋白质的首选 用于蛋白质免疫印迹、凝胶内染色.
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适配 上样Buffer
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LDS样本Buffer
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Tris-甘氨酸SDS上样Buffer
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LDS样本Buffer
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Tricine SDS样本Buffer
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Tris-甘氨酸上样Buffer
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Tris-甘氨酸上样Buffer
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适配 电泳Buffer
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MOPS 电泳Buffer
适用中高分子量蛋白分离
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Tris-甘氨酸SDS电泳Buffer
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Tris-乙酸电泳Buffer
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Tricine SDS电泳阳极Buffer
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MES 电泳Buffer
适用低分子量蛋白分离
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Tris-甘氨酸电泳Buffer
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Tris-甘氨酸电泳Buffer
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Tricine SDS电泳阴极Buffer
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