ECL化学发光试剂盒用于Western blot的化学发光检测，比DAB显色的灵敏度至少高50倍，可达ng水平。原理是采用新型发光底物（Luminol），可与二抗上耦连的辣根过氧化物酶发生化学反应，发出荧光，从而可以通过用X光片压片或其它适当荧光成像设备检测样品。

在电泳的过程中，将复杂的蛋白混合物经SDS-PAGE分离，并转移到固相膜上（如PVDF、NC）等，经辣根过氧化物酶（HRP）标记的二抗与膜上的蛋白直接反应。当加入ECL化学发光试剂后，Luminol发生氧化降解，并发射波长为428nm的光，此光可经X光片（放射自显影片）感光记录下来。

镊子，1.5ml离心管，X光片，暗盒，显影液，定影液、去离子水

1、 按照常规的Western实验步骤进行操作到二抗孵育和洗涤后的膜待用。

2、 ECL工作液的配制：

        取1.5ml的eppendorf管，加入500μL A液和500μL B 液，混匀后即为ECL工作液（配制后请尽快使用）。

3、 用平头镊将膜取出，用吸水纸略吸去过多的液体(切勿接触膜的蛋白面)，然后置于一洁净保鲜膜上。

4、 根据膜的大小，按每10平方厘米膜加1ml ECL工作液的比例，滴加ECL工作液到膜上，确保使工作液均

匀覆盖在膜上，放置1-2分钟。

         5、取膜，弃ECL工作液，用吸水纸略吸去过多的液体。将膜放在两片保鲜膜中间，小心赶尽气泡。

          6、将膜固定于片夹内。暗室内压片1分钟，立即显影定影，根据结果再调整压片时间。或直接分别压片30秒，1，3，5分钟，然后一起显影定影观察结果。

4℃避光保存，一年有效。

1、 A液和B液在吸取过程中必须要更换枪头，A液和B液相互污染后会导致A液或B液逐渐失效，影响后续的使用效果。

2、 各溶液使用后，请盖紧瓶盖，以防失效。特别是B液，含有氧化剂，比较容易被还原而失效。

3、 A液和B液均对人体有害，操作时请注意适当防护。

4、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。