恩晶生物-产品-高分辨蛋白SDS-PAGE电泳预混胶试剂盒（Bis-Tris体系）

Catalog Number:
E1WP3231
Amount:
50次
产品简介
本一步法预混胶是基于经典的Laemmli蛋白电泳系统的变性聚丙烯酰胺（SDS-PAGE）胶改良后。一步法灌胶，无需等待下层胶凝固，直接灌注彩色上层胶。

   本预混胶适用于4%-20%范围内非连续浓度SDS-PAGE胶的配制和灌制，以用于6-200kD质量范围高丰度蛋白的分离和分子量鉴定，蛋白质免疫印迹，凝胶内染色，兼容含去垢剂和高盐的样本。

   本预混胶含SDS，适用于变性蛋白的SDS-PAGE电泳，建议配套使用Tris-甘氨酸SDS上样缓冲液以及Tris-甘氨酸SDS电泳缓冲液，可获得最佳的分离效果。

   本品约可配制100块常规尺寸（8cm×8cm、1mm厚）的SDS-PAGE胶，即分离胶5mL，浓缩胶1.5mL，适配10、12、15孔加样梳，可于60分钟内使用恒定电压快速分离蛋白质。

    本品特点：
- 一步法灌胶，无需等待下层胶凝固，直接灌注上层胶，简便快捷，节省时间。
- 上层胶为彩色胶（红、蓝或绿），加样孔明显清晰，方便加样。
- 分子量较小的蛋白电泳条带更为清晰
- 丙烯酰胺浓缩配方，可于室温保存，保存期长，纯度高，相对粉状的丙烯酰胺安全性更高，适用于4%-20%浓度线性范围凝胶的配制。
- 配制不使用TEMED，避免接鉵刺激性臭味，提高安全性。
- 使用过硫酸铵替代品APS-S，提高安全性、稳定性和凝聚速度。
- 配制过程简单快速，除自备和加入H₂O之外，无需另行备其它试剂。

试剂盒组份

组份	E1WP3231（50T）	E1WP3232（100T）	储存条件
组份A：Bis-Tris 分离胶	80mL	160mL	避光 2-8℃或室温
组份B：Bis -Tris 浓缩胶（红色）	10mL	20mL	避光 2-8℃或室温
组份C：Bis-Tris Buffer	100mL	200mL	室温
组份D：过硫酸铵替代品 APS-S	0.5g	1.0g	-20℃

试剂盒以外自备仪器和试剂

可调移液器、垂直板电泳仪、双蒸水

操作步骤

1. 即用即配10% APS-S(过硫酸铵替代物溶液）

组份D干粉溶于10 mL的 dH₂O中，即为10% APS-S , 应即用即配，4℃可保存1-2周，-20℃可保存数月。

2. 参考下表（单张胶的用量）选择和配制下层分离胶

Bis-Tris胶浓度	8%	10%	12%
dH₂O	2.5 mL	2.25 mL	2.0 mL
Bis-Tris Buffer	1.45 mL	1.45 mL	1.45 mL
Bis-Tris分离胶	1 mL	1.25 mL	1.5 mL
10% APS-S	50 μL	50 μL	50 μL
总体积	5 mL	5 mL	5 mL

事先备好灌胶玻璃板，按dH₂O、Buffer、分离胶的顺序配制，最后加入10% APS-S，然后立即灌胶。

3. 按下表（二张胶的参考用量）配制上层浓缩胶并在下层胶凝后灌胶

组分	上层浓缩胶（2张）
dH₂O	1.70 mL
Bis-Tris Buffer	0.86 mL
Bis -Tris 浓缩胶（红色）	0.40 mL
10% APS-S	30 μL
总体积（二块胶）	3 mL

下层胶凝聚后，在上述混合液中最后加入10%APS-S，然后立即灌胶并插入加样梳。

注意事项:

蛋白分离效果依赖PAGE胶种类与浓度、缓冲体系、电泳条件，请依据样本特点参考《凝胶选择指南表》（附2）进行选择。请按指南选择适配的凝胶体系、上样Buffer、电泳buffer和转膜 Buffer。
胶液无需抽真空脱气，但配制过程中尽量避免混入空气。
丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺未聚合之前有毒性，操作切注意防护，避免碰溅到皮肤和粘膜，如不小心滴洒到皮肤，立即用大量水冲洗即可，凝胶聚合后，则无毒性。
温度高可提高凝聚速度，可将Buffer和dH₂O适当预热，或将灌好胶板置于 37-40℃的温箱，以加速凝聚。

附1：Bis-Tris SDS-PAGE凝胶的上样、电泳和转膜方法参考

Bis-Tris 预混胶仅适用于变性凝胶电泳，为获得理想的电泳效果，推荐使用LDS 样本Buffer，分离偏低分子量蛋白时应配合使用 MES电泳Buffer，分离中至高分子量蛋白时应配合使用 MOPS 电泳Buffer，进行Western Blotting时，请使用Bis-Tris 转膜Buffer，电泳和转膜时需加入配套的样本稳定剂，则可保证蛋白的还原性。分子量参考表1，或根椐经典Tris-Glycine凝胶浓度转换选择Bis-Tris电泳体系参考表2：

表1：分子量与胶浓度选择参考

Bis-Tris胶浓度	8%	10%	12%
分离范围(MES 电泳 buffer) 低分子量	3.5-160kDa	3.5-160kDa	3.5-40kDa
分离范围kDa (MOPS 电泳 buffer) 高分子量	30-280kDa	15-260kDa	10-80

表2：Tris-Glycine凝胶浓度转换Bis-Tris电泳体系参考

Tris-甘氨酸 Gel	Bis-Tris Gel
6-8%	7% Tris-乙酸Gel+TA Buffer
10%	10% + MOPS Buffer
12%	10% + MOPS Buffer
14%	12% + MOPS Buffer
16%	12% + MES Buffer
18%	12% + MES Buffer

上样、电泳和转膜相关Buffer选择配制及操作方法如下：

1、样本预处理

	还原性样本	非还原性样本
样本	x μL	x μL
4 x LDS样本Buffer	2.5 μL	2.5 μL
1M DTT（自备）	0.5 μL	0
dH₂O 补足至	10 μL	10 μL
热变性	70℃ 10 min	70℃ 10 min

2 电泳

	还原性样本	非还原性样本
电泳Buffer	20 x MOPS电泳Buffer 25mL 或20 x MES电泳Buffer 25mL	20 x MOPS电泳Buffer 25mL 或20 x MES电泳Buffer 25mL
800×稳定剂	0.625 mL	0
dH₂O 补足至	500 mL	500 mL
电压、电流	200V. 100-125 mA
电泳时间	35 min（MES 电泳Buffer），50min (MOPS 电泳Buffer）

选用MOPS电泳Buffer或 MES电泳Buffer取决于目标蛋白的分子量，具体参考表1和表2.。

3 转膜

	还原性样本	非还原性样本
转膜Buffer	20 x Bis-Tris转膜Buffer 25mL	20 x Bis-Tris转膜Buffer 25mL
800×稳定剂	0.625 mL	0
甲醇（自备）	50 mL/单胶，100mL/双胶	50 mL/单胶，100mL/双胶
dH₂O 补足至	500 mL	500 mL
膜（自备）	硝酸纤维素或 PVDF
电压、电流	30 V. 170mA
转膜时间	60 min

附2：《蛋白电泳凝胶选择指南表》

凝胶体系	Bis-Tris 体系	Tris-Glycine 体系 (Tris-甘氨酸)	Tris-Acetate体系 (Tris-乙酸)	Tricine体系
蛋白分离范围	高分辨、高清晰锐利宽分子量范围 (2.5-300 kDa)	经典传统较宽分子量范围 (6-200kDa)	高分子量分离范围 (30-500 kDa)	低分子量分离范围 (2- 20 kDa)
产品应用	变性电泳中性 pH 体系适用于蛋白质免疫印迹、质谱分析，蛋白质翻译后修饰等对检测灵敏度要求高的应用	变性或非变性电泳经典 Laemmli 凝胶体系常用于检测蛋白分子量，蛋白质免疫印迹、凝胶内染色、适用含去垢剂和高盐的样本	变性或非变性电泳中性 pH 体系可更高效地分离、转印和分析高分子量蛋白质用于蛋白质免疫印迹、质谱分析、蛋白质翻译后修饰.	变性电泳分离、转印和分析低分子量蛋白质的首选用于蛋白质免疫印迹、凝胶内染色.
适配上样Buffer	LDS样本Buffer	Tris-甘氨酸SDS上样Buffer	LDS样本Buffer	Tricine SDS样本Buffer
适配上样Buffer	LDS样本Buffer	Tris-甘氨酸上样Buffer	Tris-甘氨酸上样Buffer	Tricine SDS样本Buffer
适配电泳Buffer	MOPS 电泳Buffer 适用中高分子量蛋白分离	Tris-甘氨酸SDS电泳Buffer	Tris-乙酸电泳Buffer	Tricine SDS电泳阳极Buffer
适配电泳Buffer	MES 电泳Buffer 适用低分子量蛋白分离	Tris-甘氨酸电泳Buffer	Tris-甘氨酸电泳Buffer	Tricine SDS电泳阴极Buffer
适配转膜Buffer	Bis-Tris转膜Buffer	Tris-甘氨酸转膜Buffer	Bis-Tris转膜Buffer	Tris-甘氨酸转膜Buffer 或Bis-Tris转膜Buffer（蛋白测序用）或0.5 x TBE
稳定剂	+	-	+/-	-

保存条件

4℃