1、 根据目的蛋白的分子量大小选择合适的凝胶浓度，再按照下面的表格配制SDS-PAGE的分离胶(即下层胶)：
不同浓度的SDS-PAGE分离胶的最佳分离范围：
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SDS-PAGE分离胶浓度
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最佳分离范围
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6%胶
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50-150kD
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8%胶
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30-90kD
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10%胶
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20-80kD
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12%胶
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12-60kD
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15%胶
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20kD以下
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2、 按照下面的配方进行配制（总体积为15ml），如有体积变动可按比例进行放大或缩小。过硫酸铵配制成10%溶液后（0.5g中加入4.5ml蒸馏水溶解），分装成小管-20℃保存，通常半年内有效。
注：如果配制非变性胶，参考上述配方，不加10%SDS即可配制成非变性PAGE胶。
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贮液（ml）
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分离胶中丙烯酰胺的终浓度（%）
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6
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8
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10
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12
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15
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蒸馏水
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6.0
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5.0
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4.0
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3.0
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1.5
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30% Acr-Bis（29：1）
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3.0
|
4.0
|
5.0
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6.0
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7.5
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1M Tris-HCl, pH8.8
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5.7
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5.7
|
5.7
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5.7
|
5.7
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10% SDS
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0.15
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0.15
|
0.15
|
0.15
|
0.15
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10%的过硫酸铵
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0.15
|
0.15
|
0.15
|
0.15
|
0.15
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TEMED
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0.01
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0.01
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0.01
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0.01
|
0.01
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3、 按照如下表格配制SDS-PAGE的浓缩胶(也称堆积胶、积层胶或上层胶)：
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成分
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配制不同体积SDS-PAGE浓缩胶所需各成分的体积(毫升)
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5%胶
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2
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3
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4
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6
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8
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10
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蒸馏水
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1.4
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2.1
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2.7
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4.1
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5.5
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6.8
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30% Acr-Bis（29：1）
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0.33
|
0.5
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0.67
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1.0
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1.3
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1.7
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1M Tris-HCl, pH6.8
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0.25
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0.38
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0.5
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0.75
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1.0
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1.25
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10% SDS
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0.02
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0.03
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0.04
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0.06
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0.08
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0.1
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10%的过硫酸铵
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0.02
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0.03
|
0.04
|
0.06
|
0.08
|
0.1
|
|
TEMED
|
0.002
|
0.003
|
0.004
|
0.006
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0.008
|
0.01
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