Calcein AM是一种广泛使用的绿色荧光细胞标记极性染料，具膜通透性，其被活细胞内的酯酶水解后，由无荧光的Calcein AM 转化为明亮绿色荧光的Calcein，荧光信号与活细胞数量成正相关，且对细胞不产生毒性，灵敏、快速、简便，安全，细胞的活力。

      本品可应用于大多数真核哺乳动物细胞，用荧光微孔板快速检测细胞活力。

1. 试剂盒的组份A室温解冻后，每管100µg的组分A加入50µL组份B溶解, 配制成2mM Calcein AM的储液;

2. 取10µL储液加入到10mL的PBS中，再加入100µL组分C，涡旋充分混匀，配制成2µM Calcein AM的染色工作液。

注：Calcein AM易水解，染色工作液应当天用完。

      注：Calcein AM的浓度应依据细胞类型不同而调整，以得到最佳效果。一般来说，满足信号足够的前提下，尽可能选择最低浓度。推荐浓度范围为 0.1~10µM。

3. 微孔板每孔检测的细胞数最低约200-500个，最高约10⁶个。细胞用PBS洗2-3次以去除血清等干扰因素,每孔细胞加入100µLPBS或以PBS重悬的细胞液

4. 每孔加入100µL染色工作液，终体积为200µL，每孔的终浓度 Calcein AM 为1µM，室温或37℃避光孵育 30-45 min：

5. 荧光酶标仪检测

Calcein AM：Ex/Em：485 nm/ 525nm，活细胞在525nm处有强荧光信号，细胞数与荧光强度呈正相关线性关系，据此可判断细胞活力。