溶酶体是含有多种酸性水解酶的囊泡状结构的细胞器，其功能作用为消化分解细胞内多余的废物、碎片、胞器、自噬小体、食物颗粒和吞噬的病毒或细菌等。溶酶体膜允许消化酶在pH4.5下工作，与微碱性胞浆（pH 7.2）相比，溶酶体内呈酸性（pH 4.5-4.8），溶酶体通过质子泵和氯离子通道从细胞质中泵出质子来维持这种pH差异。溶酶体的功能变化涉及到细胞粘附，趋化性，多药耐药性，细胞凋亡、自噬、防御、参与分泌调节 形成精子顶体等；多种疾病如砂肺、肺结核、各类溶酶体贮积症等遗传病）、休克、类风温关节炎和肿瘤等都与其紊乱相关，因此本系列探针可用于上述研究，例如，在某些肿瘤细胞的溶酶体具有较低的pH值，而有的肿瘤细胞则相反。此外，囊性纤维化和其它疾病中会发生细胞器酸化的缺陷。探针在溶酶体的形成与病理、药理、毒理研究上有较多的应用。如： Lyso-Sensor Green被用来监测由bafilomycin A1引起的神经突起囊泡跨膜pH梯度的消散，

溶酶体荧光探针系列为嗜酸性pH指示探针，是一类DND衍生物，能自由地透过细胞膜而标记活细胞，探针结构是连接了一个弱碱基的荧光基团，其中弱碱基提供质子给酸性细胞器，如溶酶体、内体、吞噬自噬体、精子及顶体等，以维持pH中性，富集并结合于细胞器的膜上，从而保留于细胞内，并且通常不受其它弱碱性透膜化合物所影响。因此，溶酶体探针对酸性细胞器有高选择性，简单、高特异性、一步法染色和示踪溶酶体。而中性红(Neutral Red) 和吖啶橙(Acridine Orange)也都可以对溶酶体进行荧光染色，但其染色缺乏特异性。溶酶体荧光探针系列的特点：

• 用于活细胞成像，包括悬浮细胞和贴壁细胞

• 纳摩尔浓度水平标记活细胞，标记效率高，

• 对酸性细胞器（如: 溶酶体、次级内体等）的高度选择性，

• 可在乙醛固定后保持稳定，

• 多色选择，可以单独或者组合使用进行多重染色。   

本探针Lyso-Sensor Blue用于研究活细胞中溶酶体的形成、功能变化等动力学，其pKa为5.1，激发/发射波长为373/425 nm，适配荧光成像，高内涵成像，微孔板荧光法或流式细胞法检测荧光信号。在中性-酸性条件下，pH值越低，其荧光强度越高，因其弱碱基遇酸发生质子化，从而减少了染料的淬灭，导致荧光增强。

本产品为试剂盒形式，除荧光探针之外，还配有分析Buffer，以保持荧光信号稳定性及胞器内保留性。

注意，本探针仅用于溶酶体的标记、定位染色，而不能用于定量, 因为溶酶体的荧光可能仅占细胞总荧光量的一小部分，因此不能通过流式细胞术或荧光光度法来定量溶酶体的数量或pH值的量化。

微量产品，在打开管盖之前，移放并恢复至室温，再将探针进行短暂离心集液于管底。

1. 将1 mM荧光探针原液（组份A）用分析Buffer（组份B）稀释100-1000倍至工作浓度1-10μM，

为减少探针过载可能产生的假信号，应尽量使用低浓度探针，但不得低于1 μM。              

注意：如果染色后细胞在无染料的培养基中培养，经常会观察到荧光信号下降和细胞膜空泡化。              

2. 培养好的细胞弃去培养基，加入预热的探针工作液。按原培养条件继续培养30min~2h, 

3. 弃染液，加入预热的新培养基，

4. 荧光显微镜或荧光酶标仪 流式细胞仪检测蓝色荧光信号，荧光光谱Ex/Em=373/425 nm。。

如果细胞染色不充分，建议增加标记浓度或延长染料在溶酶体中积累的时间。

最佳染色的探针浓度与时间应根据细胞类型与用途而调整。