JC-1 (5,5',6,6'-tetrachloro-1,1',3,3'-tetraethylbenzimidazolylcarbocyanine iodide）是阳离子羰花青染料，分子量 652，在低浓度下以单体存在，呈现绿色荧光。在较高浓度下形成 J-聚集体，呈红色荧光。JC-1在线粒体中呈现膜电位依赖性的集聚，荧光可从绿色（~525nm）跃迁到红色（~590nm）, 而红/绿荧光强度比率的降低则表明线粒体去极化。JC-1可用于多种细胞类型（包括心肌细胞和神经元）、分离的线粒体和完整组织的线粒体膜电位指示剂。

JC-1的绿色与红色荧光的比率仅取决于膜电位，而不受其他 如线粒体的大小、形状和密度等因素的影响。这些特征使 JC-1成为线粒体膜电位的灵敏标志物。因此，利用JC-1检测荧光比率技术，可以比较当细胞群受到剌激时，其应答的方式是膜电位还是线粒体数量百分比例。此方法可以分辨出细胞应答的细微差异性。例如，利用JC-1荧光比率的共聚焦成像发现，神经元响应其谷氨酸受体的激活可以产生四种不同的线粒体膜电位变化模式。

 JC-1染料最广泛的应用是检测细胞凋亡早期发生的线粒体去极化，本品为专用于检测凋亡的JC-1和凋亡诱导剂Camptothecin作为对照的试剂盒。

因细胞种类和检测方法的不同，请参考表1的标染条件或相关参考文献，或参考如下步骤：

1. 取200 μg 的JC-1用1.5mL的DMSO溶解，配成200 μM染液；

2. 每个样本用1 mL预热培养基或PBS重悬，使达到约1 × 10⁶ /mL；

3. 在对照管的1mL细胞液加入10 μL喜树碱Camptothecin。使终浓度10μM，37°C，4 h诱导凋亡，

4. 各样本加入10 μL的200 μM JC-1染液 (终浓度2 μM，约1.3µg/mL)，37°C，5% CO₂孵育15 ~30 min；

5. 各样本加2 mL预热的PBS洗一次，离心沉淀细胞；

6. 细胞沉淀中加入500 μL PBS，轻弹管壁，重悬细胞；

7. 流式细胞仪、荧光酶标仪或荧光显微镜分析： 激发波长488 nm，发射波长530 nm。

   荧光显微镜滤光器的选择参考表2，  流式检测图示例见图1。

表1.  JC-1标染细胞的条件

     表2 . JC-1.荧光显微成像的滤光片参考

图1   A正常   B 喜树碱诱导凋亡