恩晶生物-产品-低分子量蛋白SDS-PAGE电泳预混胶试剂盒（Tricine体系）

Catalog Number:
E1WP326
Amount:
50次
产品简介

低分子量蛋白电泳凝胶Tricine Gel适用于分离分子量小于10KDa的蛋白及多肽，与适配的样本Buffer和电泳buffer组成SDS变性电泳体系，对低分子量蛋白具有高分辨清晰的分离效果，后续可用于蛋白质免疫印迹、凝胶内染色等研究。

本Tricine高分辨率凝胶用于肽和低分子量蛋白分析，本凝胶系统是修饰的Tris-甘氨酸系统，即以Tricine取代了电泳缓冲液中的甘氨酸，为低分子量蛋白的高分辨而设计和使用的非连续电泳缓冲体系。

在传统Tris-甘氨酸的凝胶电泳体系中，小分子量蛋白（<10 kDa）的分离受到从SDS上样buffer和浓缩胶电泳buffer中不断游离和积累的十二烷基硫酸离子（DS）的阻碍，DS离子与小蛋白混合在一起，导致电泳条带模糊和分辨率降低。这种混合也会干扰小分子量蛋白的固定和染色。而本Tricine 凝胶体系使用较低的pH，并在电泳buffer中用Tricine替代甘氨酸,使小分子量蛋白和肽与DS离子完全分离，则在电泳中获得更清晰锐利的条带和更高的分辨率。

因此，相对Tris-甘氨酸体系，本Tricine 凝胶电泳体系的优点包括：

• 提高了低至2kDa分子量蛋白的分辨率

• 转移到PVDF膜后，提高与直接蛋白测序应用的兼容性

• 因Tricine缓冲体系的pH较低，可将蛋白修饰率降至最低。

本试剂盒约可配制50块常规尺寸（8cm×8cm、1mm厚）的PAGE胶。

试剂盒组份

组份	E1WP324（50T）	储存条件
组分A： Tricine-分离胶	85 ml	避光 7-10℃
组份B： Tricine-浓缩胶	20 ml	避光 7-10℃
组份C： Tricine-Gel Buffer	150 ml	2-8℃
组份D： 70% Glycerol	50 ml	室温
组份E：过硫酸铵替代物APS-S	0.5 g	使用前加入5mL dH₂O配成10%溶液

试剂盒以外自备仪器和试剂

可调移液器、垂直板电泳仪、双蒸水

操作步骤

1、配制与加灌16.5%的分离胶

胶浓度	16.5%分离胶
dH2O	0.75ml
Tricine-Gel Buffer	1.67ml
Tricine-分离胶	1.67ml
70% Glycerol	0.86ml
TEMED（自备）	5 μl
10% APS-S	50 μl
总体积（单张胶）	5ml

注：如果分离小于5KDa的小蛋白或多肽，建议在配制分离胶时每5mL中加入1.8g的Urea（用户自备）。

2. 配制和加灌4%浓缩胶和或10%的间隔胶

当分离大于5KDa的小蛋白时，仅配制和加灌4%的浓缩胶

当分离小于5KDa的小蛋白或多肽时，建议增配和加灌10%的间隔胶于分离胶和浓缩胶之间。

胶浓度	10%间隔胶	4% 浓缩胶
dH₂O	1.36 ml	1.73 ml
Tricine-Gel Buffer	1 ml	1 ml
Tricine-浓缩胶	0.61 ml	0.24 ml
TEMED（自备）	3μl	3 μl
10% APS-S	30 μl	30 μl
总体积（二张胶）	3mL	3mL

灌间隔胶时，无需待16.5%分离胶凝固，即可加灌间隔胶约2cm，待分离胶和间隔胶一同凝聚后，再加灌4%的浓缩胶1cm,。然后插入梳子，待凝固后进行加样和电泳。

参考：低分子量凝胶的上样、电泳和转膜操作方法

低分子量凝胶只适用变性电泳、上样、电泳和转膜相关Buffer选择配制及操作方法如下：

1、样本预处理

	还原性样本	非还原性样本
样本	x μL	x μL
4 x Tricine SDS样本Buffer	2.5 μL	2.5 μL
1M DTT（自备）	0.5 μL	0
dH₂O 补足至	10 μL	10 μL
热变性	85℃ 2 min	85℃ 2 min

2 电泳

	体积	dH₂O 补足至
10 x Tricine SDS电泳Buffer（上阴极）	25mL	250 mL
10 x Tricine SDS电泳Buffer（下阳极）	25mL	250 mL
电压、电流	125V. 80 mA
电泳时间	90 min

3 转膜

	Tricine 凝胶
转膜Buffer	10 x Tris-甘氨酸转膜Buffer 50mL 或20 x Bis-Tris转膜Buffer 25mL
甲醇（自备）	100mL
dH₂O 补足至	500 mL
膜（自备）	硝酸纤维素或 PVDF
电压、电流	25 V. 100mA
转膜时间	60 -120 min

附：《蛋白电泳凝胶选择指南表》

凝胶体系	Bis-Tris 体系	Tris-Glycine 体系 (Tris-甘氨酸)	Tris-Acetate体系 (Tris-乙酸)	Tricine体系
蛋白分离范围	高分辨、高清晰锐利宽分子量范围 (2.5-300 kDa)	经典传统较宽分子量范围 (6-200kDa)	高分子量分离范围 (30-500 kDa)	低分子量分离范围 (2- 20 kDa)
产品应用	变性电泳中性 pH 体系适用于蛋白质免疫印迹、质谱分析，蛋白质翻译后修饰等对检测灵敏度要求高的应用	变性或非变性电泳经典 Laemmli 凝胶体系常用于检测蛋白分子量，蛋白质免疫印迹、凝胶内染色、适用含去垢剂和高盐的样本	变性或非变性电泳中性 pH 体系可更高效地分离、转印和分析高分子量蛋白质用于蛋白质免疫印迹、质谱分析、蛋白质翻译后修饰.	变性电泳分离、转印和分析低分子量蛋白质的首选用于蛋白质免疫印迹、凝胶内染色.
适配上样Buffer	LDS样本Buffer	Tris-甘氨酸SDS上样Buffer	LDS样本Buffer	Tricine SDS样本Buffer
适配上样Buffer	LDS样本Buffer	Tris-甘氨酸上样Buffer	Tris-甘氨酸上样Buffer	Tricine SDS样本Buffer
适配电泳Buffer	MOPS 电泳Buffer 适用中高分子量蛋白分离	Tris-甘氨酸SDS电泳Buffer	Tris-乙酸SDS电泳Buffer	Tricine SDS电泳阳极Buffer
适配电泳Buffer	MES 电泳Buffer 适用低分子量蛋白分离	Tris-甘氨酸Native电泳Buffer	Tris-甘氨酸Native电泳Buffer	Tricine SDS电泳阴极Buffer
适配转膜Buffer	Bis-Tris转膜Buffer	Tris-甘氨酸转膜Buffer	Bis-Tris转膜Buffer	Tris-甘氨酸转膜Buffer 或Bis-Tris转膜Buffer（蛋白测序用）或0.5 x TBE
稳定剂	+	-	+/-	-

保存条件

4℃