Bradford蛋白浓度测定试剂盒是采用Bradford分光光度法测定蛋白含量，要比Lowry方法简单迅速，是测定蛋白含量的经典方法，实现了蛋白浓度测定的快速、稳定和高灵敏度。此定量方法是利用考马斯亮蓝G-250与蛋白质结合的特性，当考马斯亮蓝G-250与蛋白质结合后，溶液呈蓝色，在波长595nm有较高的吸收值，而且在一定的范围内与蛋白质的含量呈线性关系。此方法的优点是考马斯亮蓝G-250与蛋白质结合的时间短（大约为2分钟），且结合的考马斯亮蓝G-250-蛋白质复合物在溶液中可维持1小时左右。

Bradford法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响。样品中β-巯基乙醇的浓度可高达1M，二硫苏糖醇的浓度可高达5mM。但受略高浓度的去垢剂影响。需确保SDS低于0.01%，Triton X-100低于0.05%，Tween 20, 60, 80低于0.015%。含去垢剂的样品推荐使用BCA蛋白浓度测定试剂盒（E1WP201）。

可调移液器、1.5m L离心管或96孔板、涡旋振荡器、分光光度计或酶标仪（测定波长为560-610nm之间，最佳检测波长为595nm）

A、普通分光光度计操作  

1、 估计样品蛋白的浓度范围，并将样品稀释至合适浓度。

2、 取若干个带盖的1.5 mL离心管，编好号后，按下表加入试剂：

3、 盖上盖子，混匀。放置2min后，以0号管做参比在595nm下比色测定（比色应在1h内完成），记录各管的吸光值。根据管号1、2、3、4、5的吸光值以蛋白含量（μg）为横坐标，吸光值为纵坐标，绘出标准曲线。

4、 根据所测样品的吸光值，在标准曲线上即可查得相应的蛋白质含量（μg），除以加入样品的体积（XμL），乘以样品稀释倍数即为样品实际浓度。

B、酶标板操作

1、 估计样品蛋白的浓度范围，并将样品稀释至合适浓度。

2、 取一块酶标板，按照下表加入试剂：

3、 把酶标板放在振荡器上振荡30sec，放置2min后再次振荡，然后以0号孔在595nm下用酶标仪进行比色测定（比色应在1h内完成）。记录各孔的吸光值。根据孔号1、2、3、4、5的吸光值，以蛋白含量（μg）为横坐标，吸光值为纵坐标，绘出标准曲线。

4、 根据所测样品的吸光值，在标准曲线上即可查得相应的蛋白质含量（μg），除以除以加入样品的体积 （XμL），乘以样品稀释倍数即为样品实际浓度。

蛋白质标准溶液-20℃保存，考马斯亮蓝G-250染色液4℃保存，一年有效。

1、 考马斯亮蓝G-250染色液使用前请颠倒3-5次混匀。

2、 蛋白标准液请在使用前先混匀，再稀释成一系列不同浓度的蛋白标准。

3、 将考马斯亮蓝G-250染色液回复到室温再使用，有利于提高检测的灵敏度。

4、 比色应在出现蓝色2min～1h内完成。

5、 请穿实验服并戴一次性手套操作。