SDS裂解液(SDS Lysis Buffer)是一种比较强烈的细胞组织裂解液。SDS裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western Blot、ChIP(染色质免疫共沉淀，chromatin immunoprecipitation)等。

SDS 裂解液的主要成分为50mM Tris (pH8.1)，1% SDS，以及sodium pyrophosphate，β-glycerophosphate ，sodium rthovanadate，sodium fluoride，EDTA，leupeptin等多种蛋白酶抑制剂，以有效抑制蛋白降解。

用SDS裂解液裂解得到的蛋白样品可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的去垢剂等干扰物质，不建议使用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。

低温高速离心机、可调移液器、玻璃匀浆器（组织样本）、1.5m L离心管、涡旋振荡器、PB

（一）、对于细胞

1、 SDS裂解液工作液的准备（根据每次实验实际使用量配制所需体积）

            在每mL 冷SDS裂解液加入10μL 100mM PMSF混匀。冰上保存数分钟待用。

2、 样品的处理

A、 悬浮细胞

a、 离心（2000rpm，5min）收集细胞，尽量吸尽上清。

b、 用PBS洗一遍，离心（2000rpm，5min）吸尽上清，留下细胞沉淀备用。

c、 转入第3步进行操作。

B、 贴壁细胞

a、 培养好的细胞吸去培养基后，加入10mL冷PBS洗两次，每次振摇数次以尽量去除残留的培养液。

b、 用细胞刮子刮下细胞，或用EDTA溶液（不含胰酶）消化细胞使细胞脱落，并用移液器吹散细胞。

c、 将细胞悬液转至新的冰冷离心管弱，离心（2000rpm，5min）吸尽上清。

d、 用PBS洗一遍，离心（2000rpm，5min）吸尽上清，留下细胞沉淀备用。

e、 转入第3步进行操作。

3、 加入上述配制好的冷SDS裂解液工作液，加入量如下表所示：

4、 置于冰上，冰浴15 min，中途振荡两次。

5、 离心（12,000rpm，4℃）15min，取上清即为蛋白提取物，进一步进行蛋白定量（建议用BCA法）。

6、 分装保存于-20℃（短期内使用）或-70℃（长期保存），避免反复冻融。

（二）、新鲜组织

1、 SDS裂解液工作液的准备

       在每mL 冷SDS裂解液加入10μL 100mM PMSF混匀。冰上保存数分钟待用。

2、 称取100 mg左右的新鲜组织如肝脏、脑、心肌等，PBS或生理盐水冲洗，洗净血水，滤纸吸干。

3、 把组织放在一个置于冰上的离心管或培养皿中，用剪刀或刀片把组织剪切成非常细小的组织碎片，放置于玻璃匀浆器中。

4、 加入0.5～1 mL预冷的SDS裂解液工作液，冰浴上研磨组织20次。

5、 取组织匀浆液转移到1.5mL预冷的离心管，冰浴放置15min，，中途涡旋振荡2次。。

6、 离心（12,000rpm，4℃）15min，取上清为蛋白提取物，进一步进行蛋白定量（建议用BCA法）。

7、 分装保存于-20℃（短期内使用）或-70℃（长期保存），避免反复冻融。

-20℃保存，一年有效。

1、 为取得最佳的使用效果，蛋白样品尽量避免过多的反复冻融。可以适当分装后使用。

2、 裂解样品的所有步骤都需在冰上进行。

3、 有的样本要通过一些预实验来摸索最佳的适合您实验条件的裂解液的使用体积和裂解时间。

         4、一般常规提取的蛋白样品，进行后续试验不需要透析，但如果需要较大量的提取蛋白或后续试验结果不理想，则需要将提取的蛋白样品进行透析脱盐，建议使用透析袋透析后进行后续分析。

5、 请穿实验服并戴一次性手套操作。