细胞凋亡的形态学变化及生化学变化都可以通过荧光标记的的方法而检测出来，从而鉴别出正常细胞、凋亡细胞、坏死细胞以及不同凋亡时期或细胞周期。

碘化丙啶（Propidium Iodide, PI）是一种DNA结合性染料，其激发和发射波长分别为536nm和617nm，产生红色荧光，但无膜通透性，不能透过活细胞膜，只能染死细胞。因此，在荧光显微镜下观察，正常细胞不能着色，早期凋亡细胞呈微弱红光，晚期凋亡细胞红光加强，坏死细胞呈强红色荧光。采用流式细胞仪检测细胞周期时，凋亡细胞因内源性核酸酶被激活，使DNA广泛降解、断裂，DNA结构发生剧变，随着凋亡的进程，DNA断裂产生的小分子量DNA溢出胞外，细胞总DNA量降低，于正常G0/G1细胞群前出现一DNA低染细胞群，即G1峰前出现亚二倍体峰（sub-G1）或称A0细胞群，即凋亡细胞群。用本试剂盒的PI直接对细胞DNA染色后，进行流式细胞仪分析，即可检测到凋亡细胞DNA的变化。

荧光显微镜或流式细胞仪、低速离心机、微量移液器、1.5m L离心管、载玻片、盖玻片、流式细胞仪、无水乙醇、RNase A

1、 溶液A工作液的配制：

使用前，按照实验的需求量，取试验盒中10×溶液A原液用蒸馏水稀释10倍，即得溶液A工作液。

 2、按照常规的方法收集5×10⁵左右的细胞， 并用1.0ml溶液 A工作液洗涤细胞，离心（2000rpm，5min）后小心吸除上清，同时确保尽量没有细胞被吸除。 

3、观察与分析
A、荧光显微镜观察：

a、将细胞悬浮于1.0mL溶液 A工作液，取95μL细胞悬液，加入5μL PI染液，轻轻混匀，室温避光放置5～15min后。

b、将滴加于载玻片上，加盖玻片；荧光显微镜，激发和发射波长分别为536nm和617nm，绿光*BG12滤光镜观察，拍照

B、流式细胞仪分析：

              a、加入0.3ml溶液 A工作液重悬细胞，并将0.3ml细胞悬液全部缓慢转移至1.2ml -20℃无水乙醇中，并涡旋激烈震荡后放置-20℃冰箱中1h，或过夜。

b、离心（2000rpm，5min），吸尽上清后，加入500μL溶液 A工作液重新悬浮细胞，室温放置15min。

c、加入RNase A（用户自备）， 使其终浓度为0.25mg/ml，于37℃反应30min。

d、加入5μLPI染液室温避光染色30min。

e、上机检测，记录激发波长488nm 处红色荧光

4℃保存，碘化丙啶需避光保存。

1、 荧光染料都存在淬灭的问题，建议染色后尽量当天完成检测。活细胞或组织染色后宜立即观察。

2、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。