MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒(MTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit)被广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的检测。MTT是噻唑蓝（3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide），可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成结晶状的深紫色产物甲臜（formazan）。formazan可以被DMSO完全溶解，然后通过酶标仪测定570nm波长附近的吸光度。细胞增殖速度越快，则吸光度越高；细胞毒性越大，则细胞增殖减慢从而导致吸光度降低。

低速离心机、平板摇床、酶标仪（570nm波长）、微量移液器、96孔板、1.5m L离心管、DMSO

1、 在96孔板加入细胞100μL/孔，通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100微升5000～10000个细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定）。置37℃ 5%CO₂细胞培养箱培养24小时

2、 .加入适当浓度的0～10μL受试化合物。

3、 将96孔板在37℃，含5% CO₂空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。

4、 将5×MTT用稀释液稀释成1× MTT溶液。

5、 每孔加50μL 1× MTT溶液，在37℃孵育4小时，使MTT还原为甲臜。

6、 吸出上清液，每孔加150μL DMSO使甲臜溶解，用平板摇床摇匀。

7、 酶标仪在570nm波长处检测每孔的光密度（如无570nm滤光片，可以使用560-600nm的滤光片）。

8、 结果分析  

a、 细胞的存活率：将各测试孔的OD值减去本底OD值（完全培养基加MTT，无细胞）或空白药物孔OD值（完全培养基加受试药物的不同稀释度加MTT，无细胞），各重复孔的OD值取平均数±SD。

细胞的存活率以T/C%表示，T为加药细胞的OD值，C为对照细胞的OD值。

细胞存活率% =（加药细胞OD/对照细胞OD）×100

b、 求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC₅₀)及T/C = 10%时的药物浓度(IC₉₀)

4℃保存，MTT需避光保存，半年有效

1、 悬浮细胞用此法时必须经离心后才能吸出上清再加DMSO。

2、 Formazan的生成不仅与活细胞数成比例，也受作用时间的影响，因此当样品较多时测定的OD值可能随时间而变。

3、 MTT溶液为黄色，需避光保存，长时间光照会导致失效。当颜色变为灰绿色时，请勿使用。MTT溶液在4℃或较低温度情况下会凝固，可以20-25℃水浴温育片刻至全部融解后使用。

4、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。