1、10%APS替代物水溶液的配制:10%APS替代物溶液每次应适量配制,并尽量使用新鲜配制的溶液。 比
如称取0.1gAPS替代物,吸取1ml的超纯水完全溶解备用。10%APS替代物溶液应尽量减少室温存放
时间,以防失效并-20ºC保存。
配胶流程:(以一块0.75/1.0/1.5 mm的mini胶为例)
2、取等体积下层胶溶液A(2×) 和下层胶溶液B(2×),各 2.0/2.7/4.0 mL,混匀;
3、取等体积上层胶溶液(2×) 和红色上层胶溶液B(2×),各 0.5/0.75/1.0 mL,混匀;
注意:红色上层胶溶液B(2×)使用前请务必摇匀。
4、向步骤2的混合溶液中加入 40/60/80 ul 的 10%APS替代物水溶液 ,轻轻混匀,将混匀后的溶液注
入制胶玻璃板中,使液面和短玻璃板上沿之间的距离比梳齿长 0.5 cm 即可。
注意:① 此溶液为过量,请勿全部注入;
② 加入10%APS替代物水溶液后,需轻柔混匀,防止过多氧气混入胶溶液,抑制凝胶聚合。
5、向步骤3的混合溶液中加入 10/15/20 ul 的 10% APS替代物水溶液 ,轻轻混匀,无需等待下层胶凝
固,即可将混匀后的溶液轻缓注入制胶玻璃板中,轻轻插入梳齿;
注意:① 加入上层胶混合液时一定要轻缓并左右平移加入,而不是集中在一个位置灌制,以免上层胶
溶液冲入下层胶而破坏上下层胶分界线的平整度。
② 加入10%APS替代物水溶液后,需轻柔混匀,防止过多氧气混入胶溶液,抑制凝胶聚合。
6、待胶全部凝固后 ( 约 20 min),拔去梳齿即可用于电泳。
注意:胶凝固后上下层胶分界线的平整度可能会稍差于液封法,但不影响后续电泳结果。
上层胶配方
|
凝胶
厚度
|
上层胶
溶液A(2×)
|
红色上层胶
溶液B(2×)
|
10%APS替代物水溶液
|
0.75 mm
|
0.5 ml
|
0.5 ml
|
40 ul
|
1.00 mm
|
0.75 ml
|
0.75 ml
|
60 ul
|
1.50 mm
|
1.0 ml
|
1.0 ml
|
80 ul
|
下层胶配方
|
凝胶
厚度
|
下层胶
溶液A(2×)
|
下层胶
溶液B(2×)
|
10%APS替代物水溶液
|
0.75 mm
|
2.0 ml
|
2.0 ml
|
160 ul
|
1.00 mm
|
2.7 ml
|
2.7 ml
|
216 ul
|
1.50 mm
|
4.0 ml
|
4.0 ml
|
320 ul
|