D-荧光素（D-Luciferin）是荧光素酶（Luciferase）的常用底物，普遍应用于整个生物技术领域，特别是体内活体成像技术。其作用机制是在ATP和荧光素酶的作用下，荧光素底物能够被氧化发光。当荧光素过量时，产生的光量子数与荧光素酶的浓度呈正相关性（见下图）。

将携带荧光素酶编码基因（Luc）的慢病毒转染入细胞后构建稳定表达细胞株，构建原位肿瘤模型，之后注入荧光素底物，通过IVIS系统来检测光强度变化，从而实时监测疾病发展状态或进行药物药效评价等。也可以利用ATP对此反应体系的影响，根据生物发光强度的变化来指示能量或生命体征。

   D-光素也常用于体外研究，包括荧光素酶和ATP水平分析；报告基因分析；高通量测序和各种污染检测。目前有三种产品形式：D-荧光素（游离酸），D-荧光素盐（钠盐和钾盐）。主要差别在于溶解特性：前者的水溶性以及缓冲体系的溶解性都较弱，除非溶于弱碱如低浓度NaOH和KOH溶液。可溶于甲醇和DMSO；后者能够易溶于水或缓冲液中，使用方便，溶剂无毒性，特别适合体内实验。配成溶液后的这三种产品，在绝大多数的应用上都没有实质性的差别。

   D-萤光素钾盐的英文名称为(S)-4,5-Dihydro-2-(6-hydroxy-2-benzothiazolyl)-4-thiazolecarboxylic acid potassium salt; D-Luciferin firefly, potassium salt，其CAS NO.为115144-35-9，分子式为C₁₁H₇N₂O₃S₂K，其分子量为318.42，易溶于水（60 mg/mL）在无水乙醇、DMSO和DMF中的溶解度分别约为0.25、10和16.7mg/ml，也可溶解于DPBS中，溶解度约为25mg/ml。本品为淡黄色粉末，纯度（HPLC）≥98%。

1. 体外生物发光检测

1）用无菌蒸馏水溶解D-荧光素钾盐，配制成30 mg/mL的储存液 (100-200×) ，混匀。立即使用，或分装于-20℃避光保存，避免反复冻融。

2）用预热好的细胞培养基将储存液稀释至0.15-0.3 mg/mL的工作液浓度。

3）去除细胞培养基。

4）待图像分析前，向细胞内添加荧光素工作液，37℃孵育5-10 min，然后进行图像分析。

2. 活体成像分析

1）用无菌的DPBS (w/o Mg2+、Ca2+) 配制15 mg/mL的荧光素的储存液，混匀。

2）用0.2 µm滤膜过滤除菌。立即使用，或分装于-20℃避光保存，避免反复冻融。

3）腹腔注射（i.p.），按照150 mg/kg的荧光素/体重浓度进行注射，以小鼠为例，每只小鼠体重假定20g，每只小鼠用量3mg；

4）注射入体内10-15 min（待光信号达到最强稳定平台期）后进行成像分析。

注：建议对每只动物模型都需要建立荧光素酶动力学曲线，从而确定最高信号检测时间和信号平台期。

运输条件：4℃冰袋运输；

短期保存：4℃干燥避光

长期保存：-20℃干燥避光

母液保存：-20℃避光

一年有效。

1、本品（firefly luciferin）和甲虫荧光素（beetle luciferin）、萤光素钾盐仅是不同别名，以CAS号115144-35-9为准。

2、注射方式、动物类型以及体重等都会影响信号的激发，因此建议每次实验都要做荧光素酶动力学曲线，确定最佳信号

平台期和最佳的检测时间。

3、如果要进行ATP的检测，尽量避免外源ATP的污染，如操作时戴手套并使用ATP-free的实验耗材，在进行荧光素的溶解

时应使用ATP-free无菌水。

4、为避免反复冻融，本产品配制成溶液后建议适当分装后-20℃或-80℃保存。为防止氧化，如有条件，可以对储存液充

氮气或氩气后保存。

5、对于检测灵敏度要求特别高的实验，建议使用新鲜配制的本产品。

6、在进行D-荧光素钾盐的溶解时，应使用无钙镁离子的DPBS，因钙镁离子可能会抑制荧光素酶的活性，此外镁离子可

能会对荧光素的氧化造成影响，从而影响检测。

7、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

8、 本产品仅作科研用途！